Preparation and Extraction of Genomic DNA: জিনোমিক ডিএনএ, জিনগত উপাদান যা একটি জীব তৈরি এবং বজায় রাখার নির্দেশনা বহন করে, বিভিন্ন আণবিক জীববিজ্ঞানের কৌশলগুলির একটি গুরুত্বপূর্ণ উপাদান। বিভিন্ন জৈবিক নমুনা থেকে এর নিষ্কাশন অসংখ্য গবেষণা এবং ডায়াগনস্টিক অ্যাপ্লিকেশনের একটি অপরিহার্য পদক্ষেপ। জিনোমিক ডিএনএ-র প্রস্তুতি এবং নিষ্কাশনের জন্য সেলুলার কাঠামোকে ব্যাহত করা, ডিএনএকে অন্যান্য কোষীয় উপাদান থেকে আলাদা করা এবং নিষ্কাশিত ডিএনএ বিশুদ্ধ করার লক্ষ্যে কয়েকটি পদক্ষেপ জড়িত।
নমুনা প্রস্তুতি
ডিএনএ নিষ্কাশনের আগে, ডিএনএ প্রকাশের সুবিধার্থে আগ্রহের নমুনা প্রস্তুত করা হয়। এর মধ্যে কোষের উপাদানগুলিকে মুক্ত করার জন্য কোষের সমজাতকরণ বা ব্যাঘাত, প্রোটিন এবং অন্যান্য সেলুলার উপাদানগুলির এনজাইমেটিক হজম এবং কোষকে লাইস করার জন্য রাসায়নিক দিয়ে চিকিত্সা এবং ডিএনএ দ্রবণীয় করা জড়িত থাকতে পারে।
নিষ্কাশন কৌশল
জিনোমিক ডিএনএ নিষ্কাশনের জন্য বিভিন্ন কৌশল নিযুক্ত করা হয়, প্রতিটির নিজস্ব সুবিধা এবং সীমাবদ্ধতা রয়েছে। সাধারণ পদ্ধতির মধ্যে রয়েছে:
সল্টিং-আউট পদ্ধতি: এই পদ্ধতিটি ডিএনএ দ্রবণীয় রেখে প্রোটিন এবং অন্যান্য সেলুলার উপাদানগুলিকে উত্তেজিত করতে উচ্চ লবণের ঘনত্ব ব্যবহার করে।
জৈব নিষ্কাশন: এই পদ্ধতিতে জৈব দ্রাবক, যেমন ফেনল এবং ক্লোরোফর্ম, জৈব এবং জলীয় পর্যায়ে তাদের ডিফারেনশিয়াল দ্রবণীয়তার উপর ভিত্তি করে অন্যান্য সেলুলার উপাদানগুলি থেকে ডিএনএ বের করার জন্য ব্যবহার করা হয়।
এনজাইমেটিক লাইসিস: এই পদ্ধতিতে লাইসোজাইম এবং প্রোটিনেজ কে-এর মতো এনজাইমগুলি ব্যবহার করে প্রোটিন এবং অন্যান্য কোষীয় উপাদানগুলিকে হজম করার জন্য, ডিএনএ অক্ষত থাকে।
চৌম্বক পুঁতি-ভিত্তিক বিচ্ছিন্নতা: এই পদ্ধতিটি নমুনা থেকে ডিএনএ ক্যাপচার এবং বিচ্ছিন্ন করতে নির্দিষ্ট ডিএনএ-বাইন্ডিং অণুগুলির সাথে প্রলিপ্ত চৌম্বকীয় পুঁতি ব্যবহার করে।
নিষ্কাশিত ডিএনএ পরিশোধন
নিষ্কাশনের পরে, বিশুদ্ধ ডিএনএকে আরএনএ, প্রোটিন এবং লবণের মতো অবশিষ্ট দূষক অপসারণের জন্য আরও পদক্ষেপ নেওয়া হয়। সাধারণ পরিশোধন পদ্ধতির মধ্যে রয়েছে:
ইথানল বৃষ্টিপাত: ডিএনএ ইথানলের উচ্চ ঘনত্ব ব্যবহার করে দ্রবণ থেকে ক্ষরণ হয়।
কলাম ক্রোমাটোগ্রাফি: ডিএনএ একটি বিশেষ রজনে পরিপূর্ণ একটি কলামের মধ্য দিয়ে পাস করা হয় যা বেছে বেছে ডিএনএকে আবদ্ধ করে এবং এটিকে অন্যান্য উপাদান থেকে আলাদা করে।
ডিএনএ ফলন এবং বিশুদ্ধতা নির্ধারণ
নিষ্কাশিত ডিএনএর পরিমাণ এবং বিশুদ্ধতা ডাউনস্ট্রিম অ্যাপ্লিকেশনের জন্য অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। DNA এর ঘনত্ব সাধারণত 260 nm এ আলোর শোষণ পরিমাপ করে স্পেকট্রোফটোমেট্রি ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়। বিশুদ্ধ ডিএনএ একটি A260/A280 অনুপাত প্রায় 1.8 প্রদর্শন করে, যা প্রোটিন বা RNA দ্বারা ন্যূনতম দূষণ নির্দেশ করে।
UV শোষণ পদ্ধতি
ইউভি শোষণ পদ্ধতি ডিএনএ ঘনত্ব এবং বিশুদ্ধতা উভয় নির্ধারণের জন্য একটি সহজ এবং বহুল ব্যবহৃত কৌশল। এই পদ্ধতির পিছনে নীতি হল যে DNA 260 nm তরঙ্গদৈর্ঘ্যে অতিবেগুনী আলো শোষণ করে। একটি ডিএনএ দ্রবণের শোষণ সরাসরি এর ঘনত্বের সমানুপাতিক। 260 nm এ একটি DNA দ্রবণের শোষণ পরিমাপ করে, কেউ দ্রবণে DNA এর ঘনত্ব অনুমান করতে পারে।
ডিএনএর বিশুদ্ধতা UV শোষণ পদ্ধতি ব্যবহার করেও নির্ধারণ করা যেতে পারে। প্রোটিন এবং আরএনএও অতিবেগুনি রশ্মি শোষণ করে, তবে ডিএনএর চেয়ে ভিন্ন তরঙ্গদৈর্ঘ্যে। 260 nm এবং 280 nm উভয় ক্ষেত্রে একটি DNA দ্রবণের শোষণ পরিমাপ করে, কেউ A260/A280 অনুপাত গণনা করতে পারে। আনুমানিক 1.8 অনুপাত বিশুদ্ধ ডিএনএ নির্দেশ করে, যখন নিম্ন বা উচ্চ অনুপাত যথাক্রমে প্রোটিন বা আরএনএ দ্বারা দূষণের পরামর্শ দেয়।
ডিএনএ নিষ্কাশন অ্যাপ্লিকেশন
জিনোমিক ডিএনএ নিষ্কাশন বিভিন্ন আণবিক জীববিজ্ঞান কৌশলগুলির একটি অপরিহার্য পদক্ষেপ, যার মধ্যে রয়েছে:
পলিমারেজ চেইন রিঅ্যাকশন (পিসিআর): জিন সনাক্তকরণ, ক্লোনিং এবং সিকোয়েন্সিংয়ের জন্য ডিএনএ পরিবর্ধন।
নিষেধাজ্ঞা এনজাইম হজম: বিশ্লেষণ এবং ম্যানিপুলেশনের জন্য ডিএনএকে নির্দিষ্ট অংশে কাটা।
সাউদার্ন ব্লট হাইব্রিডাইজেশন: একটি নমুনায় নির্দিষ্ট ডিএনএ সিকোয়েন্স সনাক্ত করা।
জিনোটাইপিং: একজন ব্যক্তি বা জীবের জেনেটিক মেকআপ নির্ধারণ করা।
ডিএনএ ক্লোনিং: গবেষণা বা জৈবপ্রযুক্তিগত উদ্দেশ্যে নির্দিষ্ট ডিএনএ খণ্ডের কপি তৈরি করা।
আরও পড়ুন: করিমপুর-১ গভর্মেন্ট আইটি আই – এ অত্যাধুনিক মেটাভার্স [থ্রি ডি মাধ্যম] প্রযুক্তির ক্লাস শুরু হয়েছে।
